类器官是由干细胞或病人身上提取的肿瘤组织在特定的3D体外微环境下自组织发育而来的、高度模拟体内真实器官特征的小型化体外器官模型。与二维细胞培养和动物模型相比，类器官呈现出更加复杂的空间形态，可以更好地模拟组织器官的功能和生理反应。类器官技术的崛起，预示着新药研发进入了“低风险、低投入、高回报”的新纪元。
在中国，肝脏类疾病可能导致严重的肝功能衰竭和肝癌，治疗难度大，而历史肝病患者人数记录高达4.47亿，是最值得关注的高发病症之一。肝类器官技术即能够模拟酒精性肝病（ALD），也可以构建HBV感染的肝脏类器官系统，为肝脏疾病提供新的研究思路和治疗手段。
肝类器官培养通常需要四个阶段，iPSC培养和传代，iPSC向内胚层分化，肝内胚层分化，肝类器官培养与扩增分化。细胞因子作为肝类器官培养的基本原料，参与细胞的定向分化与增殖。
图1 肝类器官培养流程
第一阶段：iPSC培养和传代
以多能干细胞作为起始样本，在包被明胶的培养皿上加入裂霉素处理过的小鼠胚胎成纤维细胞（MEFs）的细胞悬浮液，促进iPSC增殖并抑制其分化。随后将传代后的iPSC接种于明胶上并加入iPSC培养基，培养3-5天。重组人bFGF蛋白（Cat#TL-901）有效促进iPSC增殖。
表1 肝类器官在第一阶段的培养基配制
在包被基质胶（Cat#AS-41-5）的培养皿中加入基础培养基，加入细胞消化液后离心并收集沉淀细胞。将收集的iPSC接种到包被基质胶的平板上过夜培养。随后，用DEs培养基换液并继续培养6天。重组人bFGF蛋白（Cat#TL-901）和重组人Activin A蛋白（Cat# TL-910）参与iPSC向内胚层分化。
表2 肝类器官在第二阶段的培养基配制
第三阶段：肝内胚层分化
用HEs培养基换液并培养3天，用HEs（II）培养基换液并在低氧条件下培养4天，随后转移至常氧条件下继续培养8天。重组人bFGF蛋白（Cat# TL-901）参与肝内胚层分化。
表3 肝类器官在第三阶段的培养基配制
第四阶段：肝类器官培养与扩增分化
在培养9-12天后，成熟的肝细胞会形成囊泡状结构，加入基质胶（Cat#AS-41-5）并添加HM培养基，定期更换培养基培养。用EM培养基替换HM培养基，低氧条件下培养4天。用DM培养基替换EM培养基，常氧条件下培养6天。重组人bFGF蛋白（Cat# TL-901）和重组人EGF蛋白（Cat#TL-613）协助肝类器官的扩增与分化。
表4 肝类器官在第四阶段的培养基配制
产品特点
安全性能高：无LDEV(乳酸脱氢酶升高病毒)、细菌及支原体
浓度多样：浓度范围在8-20 mg/mL之间
低内毒素：内毒素含量＜1.5EU/mL
性能稳定: 成胶性能稳定
采用COP瓶包装：可耐受-196°C低温储存、不易破碎、无蛋白吸附性、不易产生脱片立海源类器官相关新品重组蛋白推荐
参考文献
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