100mL
2~8℃
12个月
液体
本品为无色至淡黄色透明溶液,有粘性,含5%DMSO。适用于PBMC、T淋巴细胞、NK细胞等免疫细胞冻存。仅供科研用途。
准备细胞
1. 待冷冻细胞配制成细胞悬液(机械法或酶法解离)。
2. 细胞悬液离心获得沉淀。
3. 去除上清液-注意:尽可能多地移除清洗液,以降低冻存液被稀释程度。
细胞冻存
1. 加入预冷的(2-8°C)冻存液。
a. 细胞密度:细胞密度按照常规细胞培养方案0.5-30×106细胞/mL(可以更高)。
b. 冻存液已经混合了DMSO,不需要再添加其他任何冻存剂。
2. 预冷:细胞/冻存液混合悬液2-8°C孵育约10分钟。
3. 程序降温:
a. 如使用程序降温盒则应将冻存的细胞悬液置于提前预冷至2-8°C的降温盒中,再将程序降温盒置于-80°C冰箱中,24h后移入液氮罐(低于-130°C)长期保存。
b. 如使用程序降温仪对冻存的细胞悬液进行-1°C/min进行降温至-100℃后,应立即置于液氮罐(低于-130°C)中长期保存。
c. 冻存后的样品应在液氮罐(低于-130°C)中长期保存,如若放置于-80°C冰箱,仅建议短期储存(数周至数月)。
样品解冻
1. 解冻复苏:在37°C水浴或同类似的机械解冻装置中快速解冻样品。
a. 样品解冻时应轻轻地旋转样品,直到所有可见的冰都融化。1mL冻存样本解冻时间大约2-3分钟。
b. 不允许样品在冷冻温度(0-10°C)以上加热。水浴中拿出来时,冻存管触感是冷的。不推荐被动解冻。
2. 立即用培养基或等效等渗介质稀释细胞/冷冻液混合物。
a. 稀释程序可以在一个步骤中完成。
b. 稀释介质温度应在20°C到 37°C之间。
c. 建议稀释比为1:10(样品与介质)或更大。
3. 合适的条件下培养细胞或立即使用细胞。